محصول DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P یکی از محصولات تولیدی کمپانی سیگماآلدریچ می باشد. این کمپانی یکی از تولید کننده محصولات تخصصی در جهان بشمار می رود. یکی از برندهای معروف در دنیاست، بطوری که محصولات تولیدی این شرکت را در تمامی آزمایشگاهها ، مراکز تحقیقاتی و پژوهشگاهی می توان یافت.
کمپانی مرک آلمان در سال 2015 توانست امتیاز شرکت تولیدی مواد شیمیایی، و محصولات سیگماآلدریچ را خریداری نموده و از آن پس تمامی مواد تولیدی این شرکت تحت نظر و لیسانس کمپانی مرک آلمان به بازارهای جهانی ارسال گردد. شرکت دانش پژوهان شیمی یکی از بزرگترین وارد کنندگان مواد شیمیایی آزمایشگاهی در کشور می باشد که با اخذ نمایندگی در یکی از کشورهای همسایه توانسته محصولات تولیدی کمپانی های مرک و سیگماآلدریچ را وارد و به دست مشتریان محترم خود نماید. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
امیدواریم بتوانیم با ارائه بهترین محصولات (با کیفیت و قیمت مناسب) شما را برای رسیدن به اهدافتان یاری نماییم. تشخیص سریع سونولیز پلی اتیلن گلیکول بر روی عملکرد نانو مواد کربنی زیست شناسی و پزشکی تجربی (میوود،نیوجرسی)(2015-02-11)
کارشناسان :
نانولوله های کربنی تک جداره (sscnt) (mallat1 antisense oligo 3) رشد سلول های مولتیپل میلوما را در داخل بدن مهار می کند انتشار: 13 دسامبر 2018 doi: 10.3791/58598
Jianhong Lin*1,2، Yi Hu*1، Jian-Jun Zhao1
1گروه بیولوژی سرطان، موسسه تحقیقاتی لرنر، کلینیک کلیولند، 2بخش انکولوژی پزشکی، موسسه سرطان دانا-فاربر، دانشکده پزشکی هاروارد
* این نویسندگان به طور مساوی کمک کردند
این نسخه خطی سنتز الیگونوکلئوتیدهای DNA ضد سنس گپگمر (swcnt anti-malat1) با نانولوله کربنی تک جداره (swcnt) – کونژوگه را توصیف می کند (swcnt anti-malat1)، که تحویل قابل اعتماد و اثرات درمانی قوی swcnt را نشان می دهد. Anti-Marat 1 in vitro و in vivo. روشهایی برای سنتز، اصلاح، کونژوگاسیون و تزریق swcnt anti-malat1 شرح داده شده‌اند.
DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P نانولوله های کربنی تک جداره (SWCNTs)، نوع جدیدی از نانوذرات، برای رساندن انواع داروها مانند پروتئین ها، الیگونوکلئوتیدها و داروهای مولکول کوچک مصنوعی به سلول ها استفاده شده است. SWCNT دارای اندازه قابل تنظیم، مساحت سطح بزرگ است و می تواند داروها را از طریق تغییرات مختلف روی سطح خود به طور انعطاف پذیر متصل کند؛ بنابراین، سیستم ایده آلی برای انتقال دارو به سلول ها است.
RNA های طولانی غیر کد کننده (lnRNAs) گروهی از RNA های غیر کد کننده طولانی تر از 200nt هستند که نمی توانند به پروتئین تبدیل شوند، اما نقش مهمی در فرآیندهای بیولوژیکی و پاتوفیزیولوژیکی دارند. رونوشت 1 مرتبط با آدنوکارسینوم ریه متاستاتیک (malat1) یک lncRNA بسیار حفاظت شده است. نتایج نشان داد که سطوح بالاتر Malat1 با پیش آگهی ضعیف‌تر در سرطان‌های مختلف، از جمله مولتیپل میلوما (MM) مرتبط است.
ما دریافتیم که Matr1 ترمیم DNA و مرگ سلولی را در MM تنظیم می کند؛ بنابراین، Matr1 ممکن است به عنوان یک هدف درمانی در MM در نظر گرفته شود. با این حال، تحویل کارآمد الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس برای سرکوب کردن مالات 1 در داخل بدن یک مشکل باقی مانده است. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
در این مطالعه، ما swcnt را با PEG-2000 اصلاح کردیم، و اولیگونوکلئوتیدهای ضد MAT1 را به آن کونژوگه کردیم، تحویل آزمایشگاهی این ترکیب را آزمایش کردیم، به صورت داخل وریدی در مدل موش MM تزریق شد، و مهار قابل توجهی از پیشرفت MM مشاهده کردیم، که نشان می‌دهد swcnt یک شاتل ایده آل برای DNA spat ضد malat 1 است.
SWCNT ها دسته جدیدی از نانو مواد هستند که می توانند انواع مختلفی از داروها مانند پروتئین ها، مولکول های کوچک و اسیدهای نوکلئیک را با تحمل ایده آل و حداقل سمیت در شرایط in vitro1 و in vivo ارائه دهند. swcnt های عامل دار بسیار زیست سازگار و محلول در آب هستند، می توانند به عنوان نقاط شاتل مولکولی کوچک عمل کنند و می توانند مولکول های کوچک را در سراسر غشای سلولی 3،4،5 حمل کنند.
lnRNA ها گروهی از RNA ها (gt؛ 200 nt) هستند که از ژنوم به mRNA رونویسی می شوند اما نمی توانند به پروتئین تبدیل شوند. شواهد انباشته نشان می دهد که ncRNA ها در تنظیم بیان ژن نقش دارند و در شروع و پیشرفت بیشتر انواع سرطان از جمله MM7،8،9 نقش دارند. mallat1 یک رکورد 2 غیر کدکننده غنی شده با هسته 2 (neat2) و lncRNA10 بسیار حفاظت شده است. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
MAT1 در ابتدا در سرطان ریه سلول غیر کوچک متاستاتیک (NSCLC)11 شناسایی شد، اما در بسیاری از تومورها بیش از حد بیان شده است. بیماران مبتلا به MM مدولاری خارج از دوره کشنده، در مقایسه با بیمارانی که فقط با MM 15 تشخیص داده شده بودند، به طور قابل توجهی سطوح بالاتری از بیان مالات 1 داشتند.
در یک مطالعه قبلی، ما نشان دادیم که الیگونوکلئوتیدهای ضد MAT1 در mm16 با استفاده از الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس DNA گپمر که mm1 (ضد amalat1) را هدف قرار می دهند، به شدت باعث آسیب DNA و آپوپتوز در mm16 می شوند. DNA گپمر از DNA آنتی سنس تشکیل شده است و توسط 2′-ome-RNA مرتبط شده است، که ممکن است فعالیت mirat1 را از طریق RNase H پس از اتصال به 17 ترویج کند.
برای آزمایش اثر تحویل الیگونوکلئوتیدهای آنامورفیک ضد Malat1، DNA گزارشگر ضد Malat1 به CNT های عامل دار با آمین DSPE-PEG2000 کونژوگه شد. سپس SWCNT anti-Matrat1 به صورت داخل وریدی به مدل موش تکثیر MM تزریق شد؛ مهار قابل توجهی پس از چهار تیمار مشاهده شد.
تمام آزمایشات مربوط به حیوانات از قبل توسط کلینیک کلیولند IACUC (کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات سازمانی) تایید شده بود.
1. سنتز swcnt های عامل دار DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
1 میلی گرم SWCNT، 5 میلی گرم آمین DSPE-PEG2000، و 5 میلی لیتر آب استریل بدون دانه را در یک ویال سوسوزن شیشه ای (20 میلی لیتر) مخلوط کنید. خوب تکان دهید تا تمام معرف ها کاملا حل شوند.
ویال را در یک سونار حمام آب با قدرت 40 وات در دمای اتاق به مدت 1 ساعت (RT، 20 دقیقه در 3، تعویض آب هر 20 دقیقه برای جلوگیری از گرم شدن بیش از حد) قرار دهید. سپس، برای جمع آوری مایع رویی، با گرمای 24000 به مدت 6 ساعت سانتریفیوژ کنید. این محلول swcnt کاربردی را می توان در دمای 4 درجه سانتی گراد به مدت 2 ماه نگهداری کرد. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
1 میلی لیتر از محلول SWCNT را از مرحله 1.2 به یک واحد فیلتر سانتریفیوژ MWCO 100 کیلو دالتون اضافه کنید و سپس 4 میلی لیتر آب استریل اضافه کنید. برای حذف آمین های اضافی DSPE-PEG2000 به مدت 10 دقیقه در RT در 4000 x g سانتریفیوژ کنید. اضافه کردن 4 میلی لیتر آب و سانتریفیوژ کردن را 5 بار تکرار کنید. پس از هر سانتریفیوژ، بیش از 0.5 میلی لیتر از محلول swcnt باقیمانده در فیلتر باقی می ماند.
پس از شستشوی نهایی، غلظت محلول SWCNT باقیمانده در فیلتر را با استفاده از طیف سنج UV/Vis در 808 نانومتر اندازه گیری کنید. غلظت نهایی معمولاً حدود 50 میلی گرم در لیتر است (بر اساس روش توسعه یافته توسط Kam et al.18 محاسبه می شود).
مطمئن شوید که SWCNT های عملکردی شده با DSPE-PEG پس از مرحله 1.4 محلول در آب هستند و در محلول های بیولوژیکی مختلف بدون تجمع قابل توجه پس از چند هفته پایدار هستند. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
2. ادغام RNA اصلاح شده 2′-O با پرس و جوی ضد MAK 1 DNA گپمر با sscnt عامل دار
0.5 میلی گرم Sulfa LC-SPDP را به 450 میکرولیتر SWCNT عامل دار با آمین DSPE-PEG2000 اضافه کنید. 50 میکرولیتر 10x PBS اضافه کنید و به مدت 2 ساعت در RT انکوبه کنید.
برای حذف سولفو-LC-spdp اضافی، واکنش مرحله 2.1 را به یک واحد فیلتر سانتریفیوژ MWCO 100 کیلو دالتون و سپس 4 میلی لیتر آب بدون نوکلئاز اضافه کنید. سانتریفیوژ در 4000 x g به مدت 10 دقیقه در RT، با اضافه کردن 4 میلی لیتر آب تکرار کنید و 5 بار سانتریفیوژ کنید. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
200 نانومولار DNA گپمر anti-amalat1-cy3 اصلاح شده با گوگرد را به 1.5 میلی لیتر محلول تجاری DTT اضافه کنید و به مدت 90 دقیقه در RT انکوبه کنید. محصول را با ستون Naph طبق پروتکل سازنده خالص کنید. Anti-malat 1-cy3 را با 500 میکرولیتر PBS 1x بدون نوکلئاز استریل شستشو دهید.
SWCNT عملکردی را می توان با DTT ذخیره کرد، که ممکن است پیوندهای دی سولفیدی تشکیل شده در طول ذخیره سازی DNA گزارشگر ضد Amalat1 سولفوره شده را بشکند. DTT اضافه شده را می توان با عبور از یک ستون NNAP قبل از ترکیب به SWCNT حذف کرد. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
محلول کلرو-Spe-pgp–peg2000-آمین swcnt باقیمانده سولفونه شده را در فیلتر جمع آوری کنید و آن را با 500 میکرولیتر محلول ضد Mara T1-Cy3 رقیق کنید. سپس در دمای 4 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه کنید. swcnt conjugated anti-malat1 را می توان به مدت 3 هفته در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری کرد. با پیروی از همان روش، swcnt های مزدوج با الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس درهم می توانند سنتز شوند و به عنوان کنترل های swcnt استفاده شوند.
3. تزریق ورید دم swcnt-anti-Makat
یک مدل موس با پهنای mm ایجاد کنید.
برای بهترین مقایسه، 14 تکان دادن به طور تصادفی جایگزین شدند. موش‌های Cb17-prkdcscid J (8 هفته‌ای) به گروه‌های تجربی یا کنترل (7 موش در هر گروه) با نسبت نر به ماده یکسان وارد شدند.
میز کار را تمیز کرده و با الکل 70 درصد ضدعفونی کنید. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
برای کمک به بیرون آمدن رگ های دم، ماوس را با استفاده از یک لامپ حرارتی گرم کنید. موس را با یک مهار تزریق دم به درستی مهار کنید.نمایندگی سیگماآلدریچ در ایران
5 x 10 mm.1s-luk-mchry سلول را از طریق ورید دم در 50 میکرولیتر PBS بدون بیهوشی تزریق کنید. محل تزریق را با یک سواب الکلی به مدت 30 ثانیه فشار دهید. ماوس تزریق شده را علامت بزنید و آن را به قفس تمیز برگردانید.
درمان را در روز 7 پس از تزریق سلولی mm.1s شروع کنید.
PBS حاوی swcnt anti-malat1 را به رگ دم موش تزریق کنید. از pbs حاوی کنترل swcnt به عنوان کنترل استفاده کنید.
با یک سواب الکلی به مدت 30 ثانیه به محل تزریق فشار وارد کنید.
قبل از بازگرداندن موش به قفس تمیز، خونریزی دم و رفتار کلی موش را به مدت 1 دقیقه مشاهده کنید. قبل از بازگرداندن قفس، تمام موش های تزریق شده را مجدداً مشاهده کنید تا مطمئن شوید که تزریق ها به خوبی تحمل می شوند.
تا پایان آزمایش هر 7 روز یکبار تزریق را تکرار کنید. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
هنگامی که سلامت عمومی موش ها رو به کاهش است، آزمایش را خاتمه دهید: رنگ پریدگی پنجه ها، هرگونه خونریزی زیر جلدی، تنگی نفس، کاهش فعالیت، فلج اندام تحتانی یا توده های قابل لمس در شکم هنگام عدم خوردن یا نوشیدن مشاهده می شود.
mm.1-موجود در روز را ارزیابی کنید اگر موش دچار فلج اندام تحتانی شد توجه ویژه ای داشته باشید.
قبل از تزریق swcnt anti-malat1، رشد تومور را با استفاده از یک سیستم تصویربرداری in vivo هفتگی 1 برابر ارزیابی کنید.
15 میلی گرم در لیتر دی لوکفرین تازه را در 1 x PBS آماده کنید.
ماوس را با تبخیر کننده ایزوفلوران بیهوش کنید (3-5٪ برای القاء و 1-3٪ برای نگهداری، بسته به وضعیت ماوس).
5 دقیقه قبل از تصویربرداری، به هر موش 150 میلی‌گرم بر کیلوگرم د-لولوفرین به صورت داخل صفاقی تزریق کنید؛ سپس با استفاده از سیستم تصویربرداری طیفی، از موش در یک مکان مستعد تصویربرداری کنید.نمایندگی سیگماآٖلدریچ
تصاویر سریال ماوس را هر 2 دقیقه تا رسیدن به اشباع لومینسانس جمع آوری کنید. با توجه به d-luluferin upau؟ فاصله تنظیم سیگنال
پس از پایان آزمایش، موش ها را با استفاده از CO2 قربانی کنید.
از آنجایی که این یک مدل پخش MM است، موش ها را به صورت زیر مدیریت کنید.
قبل از تشریح موش را وزن کنید. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
برای آزمایش شمارش کامل خون (CBC) که توسط دستگاه هموسیتومتر انجام می شود، خون محیطی را از قلب جمع آوری کنید. تعداد گلبول های سفید و گلبول های قرمز و همچنین نسبت لنفوسیت ها شاخص های اصلی هستند.
طحال را جدا کرده و وزن کنید. نسبت وزن طحال را محاسبه کنید، > 0.5% را به عنوان اسپلنومگالی در نظر بگیرید.
مغز استخوان، طحال، غدد لنفاوی، کلیه ها و بافت هایی با متاستاز آشکار جمع آوری شد.
اگر موش دچار فلج اندام تحتانی شده است، ستون فقرات را جمع کنید.
استخراج RNA و پروتئین از نمونه های مغز استخوان
تمام بافت باقیمانده را در فرمالین ثابت کنید.
برای کلسیفیکاسیون، پس از 24 ساعت تثبیت، نمونه های استخوان را به مدت 5 روز در محلول EDTA 0.25 مولار (pH 8.0) خیس کنید.
تمام نمونه ها را برای نگهداری طولانی مدت در الکل 75 درصد خیس کنید.
شدت سیگنال دو گروه لوسیفراز در همان نقطه مقایسه شد. از این دو گروه، تاریخ قربانی شدن هر موش را ثبت کنید و منحنی بقای دو گروه را با نرم افزار محاسبه کنید.
برای نشان دادن اثر مهاری DNA گپمر ضد AMAT1 در MM، بیان باکتری‌ها و Advanced 101 را کاهش دادیم و آن را روی سلول‌های H929 و MM.1S اعمال کردیم. پس از 48 ساعت، سلول‌ها جمع‌آوری شدند و از نظر کارایی ناک داون و وضعیت آپوپتوز سلول‌های ترانسفکت شده با DNA ضد لکنت یا کنترل DNA مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج qRT-PCR نشان داد که DNA gapzyme anti-Makat1 به طور موثر بیان Halat1 را در سلول های H929 و MM.1S کاهش داد (شکل 2A). وضعیت آپوپتوز توسط فلوسیتومتری تعیین شد و نشان داد که تنظیم پایین Mat1 به طور قابل توجهی آپوپتوز را القا می کند (شکل 2B).
این نتایج نشان می دهد که الیگونوکلئوتیدهای ضد MAT1 به طور موثر MM را در شرایط آزمایشگاهی مهار می کنند. با این حال، روش‌های تحویل کارآمد (اهداکننده‌ها) برای الیگونوکلئوتیدهای ضد malat1 در داخل بدن نیاز به توسعه دارند، که همچنین مانعی برای کاربرد بالینی الیگونوکلئوتیدهای آنتی‌سنس است؛ بنابراین، ما به swcnt علاقه‌مندیم. SWCNT یک نانومواد جدید برای دارورسانی است که پس از اصلاح مناسب، آبدوست و محلول است؛ بنابراین، می‌تواند اشکال مختلف محموله مانند داروهای الیگونوکلئوتیدی را تحویل دهد. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
برای بررسی راندمان تحویل swcnts در داخل بدن، ما ابتدا swcnt ها را با آمین dspe-peg2000 کاربردی کردیم، که به swcnt19 آب دوستی و ویژگی اتصال می بخشد.
DSPE-PEG (2000) Amine کدسیگما880128P و پلیمرهای مرتبط اغلب در عملکرد نانومواد کربنی در روشهایی که شامل فراصوت می شوند ، استفاده می شود. با این حال ، PEG به تخریب سونولیتیک بسیار حساس است و محصولات تجزیه PEG می تواند برای سلول های پستانداران سمی باشد. بنابراین ، ارزیابی تخریب احتمالی PEG ضروری است تا اطمینان حاصل شود که مواد نهایی حاوی آلاینده های غیر مستند نیست که می تواند مصنوعات را به نتایج تجربی وارد کند. DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P
در اینجا یک روش الکتروفورز ژل پلی اکریل آمید ساده و ارزان برای تشخیص تخریب سونولیتیک PEG است. این روش برای نظارت بر یکپارچگی سازه های فسفولیپیدPEG و PEG های زنجیره ای شاخه ای پس از زمانهای مختلف فراصوت استفاده شد. این روش نه تنها به تشخیص PEG تخریب شده کمک می کند ، بلکه باید غربالگری سریع پارامترهای فراصوت را برای یافتن شرایط مطلوب که آسیب PEG را به حداقل برساند ، تسهیل کند.
شرکت دانش پژوهان شیمی یکی از بزرگترین وارد کنندگان و فروشندگان مواد شیمیایی و آزمایشگاهی بخصوص فروش DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P سیگماآلدریج می باشد.که در زمینه واردات این محصولات از تجربه بسیار بالایی برخوردار است. شما می توانید جهت تهیه این محصولات (اصلی) با بخش فروش شرکت تماس گرفته و با کارشناسان این شرکت در ارتباط باشید و یا از طریق کانال واتساپ شرکت نام محصول به همراه میزان نیاز خود را ارسال تا در کمترین زمان پاسخ استعلام خود را دریافت نمائید.
امیدواریم بتوانیم با ارائه محصولات اصلی و با بهترین کیفیت شما را برای رسیدن به اهدافتان یاری نمائیم.
جهت محصولات بیشتر واستعلام سریع قیمت DSPE-PEG (2000) Amine کد سیگما 880128P میتوانید از طریق کانال واتساپ شرکت با ارسال نام ماده و مقدار نیاز در کمترین زمان پاسخ استعلام خود را دریافت نمائید.
راههای ارتباطی
شماره های تماس:
021-66859216 (ساعات تماس:8:30 الی 19)
021-66859220
واتساپ:09129618292 (ساعات تماس 24ساعت)
Visits: 0