آشنایی با محیط‌های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی بسیار اساسی است. این محیط‌ها به عنوان محیط‌های مناسب برای رشد و کشت میکروارگانیسم‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرند. در زیر تعدادی از محیط‌های کشت متداول در آزمایشگاه میکروبیولوژی ذکر شده است:
آگار: یک محیط کشت جامد است که از مخلوطی از آگار (ژل آگار) و مواد مغذی تشکیل شده است. این محیط برای کشت انواع میکروارگانیسم‌ها، از جمله باکتری‌ها و قارچ‌ها، استفاده می‌شود.
محیط تریپتیک سویا آگار (TSA): این محیط کشت جامد حاوی پپتون، خاکستر سویا، گلوکز و آگار است. برای کشت عمومی میکروارگانیسم‌ها به ویژه باکتری‌ها مناسب است. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
محیط ایجار: این محیط کشت نیمه‌جامد شامل خاکستر سویا، پپتون، گلوکز و آب آغشته به آگار است. برای کشت باکتری‌ها و قارچ‌ها به ویژه انواعی که نیاز به هوادهی اکسیژن دارند، مناسب است.
محیط مک کانکی: این محیط کشت جامد حاوی نیترات ناتریوم، سولفات منیزیم، فسفات دی‌پتاسیم، گلوکز و آگار است. برای کشت باکتری‌ها و قارچ‌ها با نیازهای خاصی مناسب است.
محیط نوع MacConkey: این محیط کشت جامد یا مایع حاوی پپتون، لاکتوز، کرستال ویولت، سولفات سدیم، و آگار است. برای انتخاب و شناسایی باکتری‌های گرم منفی و انتروباکترها مناسب است.
محیط برایان: این محیط کشت جامد یا مایع شامل پپتون، گلوکز، سولفات منیزیم، فسفات دی‌پتاسیم و آگار است. برای انتخاب و شناسایی باکتری‌های گرم مثبت مناسب است.
محیط تصفیه شده آب (TSB): این محیط کشت مایع شامل پپتون، گلوکز و نمک‌های مختلف است. برای رشد و کشت عمومی میکروارگانیسم‌ها مناسب است. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی محیط کشت عمومی است. که به منظور تکثیر و جداسازی باکتری های بیماری زا بخصوص باکتری هایی که برای رشد به مواد مغذی نیاز دارند. بکار می رود. بعلاوه در این محیط وجود همولیزین در باکتری ها را نیز می توان کاوش کرد. پس از اتوکلاو محیط پایه هنگامی که درجه آن تا حدود 50 درجه سانتیگراد رسید، خون دفیبرینه گاو را به نسبت 5 تا 7 درصد به آن اضافه نموده و با رعایت شرایط استریل در پلیت های استریل می ریزیم.
ممکن است بسته به نوع باکتری یکی از سه حالت ذیل مشاهده گردد:
باتوجه به آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی حال در ادامه مطلب به:
اگر به محیط پایه آگار خوندار هنگامی که درجه حرارت آن بعد از اتوکلاو در حدود 80-70 درجه سانتیگراد باشد، خون دفیبرینه گاو اضافه کنیم، محیط کشت آگارشکلاته بدست می آید. در این محیط به علت اینکه گلبوبهای قرمز خون در اثر حرارت متلاشی شده و اجزای آن خارج گشته، برای رشد باکتری هایی نظیر هموفیلوس و نایسریاها که نیاز بیشتری به مواد غذایی آماده دارند مناسب می باشد. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
همانند محیط کشت آگار خوندارBlood agar بسته به نوع باکتری همولیز و یا همولیز ناقص و عدم همولیز ایجاد می گردد.
محیطی است انتخابی و برای جداسازی گونه های سالمونلا بکار می رود. این محیط از رشد بسیاری از باکتری های روده ای (انتروباکتریاسه) به جز سالمونلا جلوگیری می نماید. در صورتی که Ecoli، کلبسیلا و پروتئوس و سایر انترو باکتریاسه ها رشد نمایند، به دلیل اینکه قند لاکتوز و یا سوکروز و یا هر دو را تخمیر می نمایند و تولید اسید می کنند، در مجاورت معرف رنگی فنل رد به رنگ زرد در می آیند. در صورتی که باکتری های لاکتوز منفی مانند سالمونلا رشد نمایند، به دلیل عدم تخمیر قند در مجاورت معرف، محیط به رنگ ارغوانی در می آید. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
محیط انتخابی است که برای جداسازی و تعیین هویت باکتری های گرم منفی می باشد. املاح صفرآوی و کریستال و یوله مانع از رشد باکتری های گرم مثبت می شوند. باکتری های تخمیر کننده ی لاکتوز (لاکتوزمثبت ها) کلنی هایی به رنگ ارغوانی و باکتری هایی که قادر به تخمیر نیستند (لاکتوزمنفی ها) کلنی هایی بی رنگ ایجاد می نمایند. رنگ ارغوانی کلنی های باکتری های لاکتوز مثبت مربوط به واکنش اسیدی است که در نتیجه تخمیر قند لاکتوز در مجاورت املاح صفرآوی و جذب نوترال رد حاصل شده است. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
معرف نوترال رد در محیط قلیایی بی رنگ و در محیط اسیدی قرمز رنگ است.
محیط انتخابی برای تکثیر قارچ ها می باشد که بسیاری از باکتری ها نیز در این محیط رشد می کنند.
انتخابی بودن این محیط برای قارچ ها بر اساس PH پایین و همچنین مواد غذایی ناچیز آن است.
باکتری هایی که حاوی آنزیم دی اکسی ریبو نوکلئاز باشند، هاله صورتی رنگی اطراف کلنی ها پدید می آورند. تولوئیدین آبی در حضور DNA سالم به رنگ آبی است. ولی در صورت ریختن HCL نرمال موجب تخریب مولکول DNA شده و این ترکیب به رنگ صورتی در می آید. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
کاربرد اصلی این محیط جهت تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی باکتری ها (آنتی بیوگرام) به روش دیسک می باشد. بسیاری از باکتری هایی که سخت رشد Fastisious می باشند، نظیر Neisseria meningititidesN.gonorrhoeae در آن رشد می یابند.
این محیط برای جداسازی و نگهداری لپتو سپیراها بکار می رود. پس از استریلیزه کردن و خنک نمودن محیط، به آن 80 میلی لیتر سرم خرگوش استریل اضافه نموده، سپس به مقدار 7-5 میلی لیتر در لوله های استریل ریخته به مدت 30 دقیقه در حرارت 56 درجه سانتیگراد قرار می دهیم تا عامل مکمل موجود در سرم غیر فعال شود.
برای جداسازی لپتو سپیرا، نمونه های خون ادرار و نسج مشکوک را در این محیط کشت داده و در حرارت 29 درجه سانتیگراد به مدت 30 روز انکوبه می نماییم. متناوبا از کشت گسترش تهیه کرده و به وسیله ی میکروسکوپ با زمینه تاریک کشت را کنترل می نماییم. در اثر تکثیر لپتوسپراها کدورت جزئی در محیط به وجود می آورند که پیدایش یک حلقه شیری رنگ در قسمت بالای می تواند حاکی از رشد لپتوسپرا باشد. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
این محیط ملاک آزمایشی می باشد برای تفکیک مسیرهای تخمیر گلوکز و نهایتا ایجاد ترکیبات اسیدهای آلی بوتاندیول یا بوتیلن گلایکول بوده که از این آزمایش در تفکیک و تشخیص کلی فرم ها هز هم مورد استفاده قرار می گیرد. همچنین در تمایز بین استافیلوکوک و میکروکوک و گونه های آن از این محیط استفاده می شود.
آزمایشMR: پس از انجام کشت و انکوباسیون 37 درجه سانتیگراد به مدت 48 ساعت، مقدار6/.می لی لیتر معرف رنگی متیل رد اضافه نموده و در صورت ظهور رنگ قرمز آزمایش MR مثبت می باشد. در صورت پیدایش رنگ نارنجی آزمایش MR مثبت می باشد. در صورت پیدایش رنگ نارنجی آزمایش MR مثبت ضعیف می باشد و در صورت عدم تغییر و پایداری رنگ زرد آزمایش MR منفی می باشد. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
1- متیل رد 0/04 گرم
2- اتانول 40 میلی لیتر
3- آب مقطر 100 میلی لیتر
متیل رد را دراتانول حل نموده و به حجم 100 میلی لیتر می رسانیم.
آزمایش VP: به لوله کشت داده شده و انکوبه شده حدود6/. میلی لیتر معرف آلفا نفتول (معرف A) و مقدار 2/. میلی لیتر محلول پتاس (معرفB) اضافه کرده و خوب تکان می دهیم. اگر تغییر رنگ صورت نگرفت آن را به مدت 30 دقیقه به حال خود گذاشته و در صورتی که ظهور رنگ صورتی تا قرمز پدیدار شود، ازمایش VP مثبت و اگر تغییر رنگی صورت نپذیرد، آزمایش VP منفی خواهد بود. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
1- آلفانفتول: 5 گرم آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
2- الکل اتیلیک مطلق:100 میلی لیتر
محلول نباید تیره تر از رنگ کاه (نی) شود. در صورت لزوم باید مجددا تقطیر گردد.
1- هیدروکسید پتاسیم: 40 گرم
2- آب مقطر: 100 میلی لیتر
این ماده یک محیط مغذی است برای جداسازی گونه های سالمونلاها. که یک محیط غنی کننده Enrichment می باشد که حاوی سلنیت سدیم است و حاوی نمک صفراوی می باشد و مانع از رشد باکتری های گرم مثبت و بسیاری از باکتری های گرم منفی می گردد. میزان تکثیر سالمونلا در این محیط طی 24-12 سالع اول از رشد هریک از باکتری های روده ای سریعتر است.
بنابراین کشت ثانوی باکتری در محیط های دیگر باید ظرف همان روز (24-12 ساعت) انجام گردد. باید توجه داشت این محیط در صورت ماندن و کهنه شدن خراب شده و رنگ آن به صورتی می گراید. بنابراین هرچه کمرنگ تر باشد، تازه تر و برای کشت مناسب تر خواهد بود. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
با استفاده از این محیط سه خصوصیت مختلف باکتری را می توان سنجید و در تمام باکتری ها می توان به کار برد.
به طریقه Stab تا یک سانتی متری انتهای لوله به وسیله آنس نوک تیز در این محیط کشت می دهیم.
مواد اولیه تولید اندول یعنی اسیدآمینه تریپتوفان در پپتون های محیط موجود است.
هیدروژن سولفوره و سولفات نیز در محیط موجود است.
قوام نیمه جامد بودن محیط نیز اجازه پخش شدن و درنتیجه کدر نمودن محیط را به باکتری های متحرک می دهد.
ایجاد هیدروژن سولفوره توسط باکتری به صورت سیاه شدن محیط ظاهر می گردد و در صورت متحرک بودن باکتری کشت شده، سیاهی نیز تمام محیطی که باکتری پخش گردیده است، انتشار می یابد. سیاه شدن محصول واکنش هیدروژن سولفوره تولید شده با سولفات آهن و تشکیل رسوب سولفوره آهن سیاه رنگ می باشد.
با اضافه کردن یک میلی لیتر معرف کواکس Covacs و یک میلی لیتر کلروفرم به کشت 24 ساعته، ظهور رنگ ارغوانی در سطح کشت دلیل بر تولید ایندول توسط باکتری است. باکتری هایی که حاوی مجموعه آنزیم هایی که اصطلاحا تریپتوفاناز نامیده می گردند، باشند قادرند طی سری واکنش های شیمیایی تریپتوفان را اکسیده و اندول استیک تولید نمایند.
حرکت باکتری به واسطه پخش شدن آن از مسیر خط کشت به اطراف و کدر نمودن محیط مشخص می گردد. باکتری های فاقد حرکت تنها مسیر خط کشت را که نمایان است، کدر می کنند. برای تعیین تولید اندول می توان از محیط تریپتوز نیز استفاده نمود. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
آلدئید را در الکل به آرامی حل نموده و از بنماری 55-50 درحه سانتیکراد استفاده نموده و به آن اسید اضافه کرده و دور از نور و در 4 درجه سانتیگراد نگهداری می نماییم. رنگ معرف باید از زرد روشن تا قهوه ای روشن باشد. بعضی از نمونه ها آمیل الکل کافی نیست و با آلدئید رنگ سیاه می دهد. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
استرپتوکوک های روده ای را که غلظت زیاد نمک را تحمل می کنند، می توان به کمک این محیط از سایر استرپتوکوک ها تشخیص داد. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
از آنجا که تمام استرپتوکوک ها از تخمیر گلوکز اسید تولید می کنند در صورتی که این غلظت نمک را تحمل کنند و در این محیط رشد و تکثیر نمایند، از تخمیر گلوکز اسید تولید و محیط را به رنگ زرد در می آورند. عدم تغییر رنگ دلیل بر عدم تحمل نمک و عدم تکثیر باکتری است. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
این محیط توان باکتری را در دکر بوکسیله نمودن اسیدآمینه لیزین، تعیین می نماید. حاصل این واکنش تولیدآلکالین آمین و کادوارین می باشد. به عنوان محیط تفریقی در تمایز بین آنتر وباکتریاسه ها به کار برده می شود.
تفسیرآزمایش: از آنجا که همه آنتروباکتریاسه ها در نتیجه تخمیر قند گلوکز، اسید تولید نموده و محیط را به رنگ زرد در می آورند، محیط به رنگ زرد باقی خواهد ماند. مگرآنکه باکتری اسید آمینه مورد نظر را نیز دکربوکسیله کند. در این صورت قلیائیت حاصله، محیط به رنگ بنفش (قلیایی) در خواهد آمد. آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی
شرکت دانش پژوهان شیمی ازجمله وارد کنندگان و فروشندگان مواد شیمیایی آزمایشگاهی و میباشد و از تجربه بالایی برخوردار است. شما می توانید جهت تهیه با کیفیت و قیمت مناسب و اطلاعات مربوط به آنالیز محصولات با شرکت دانش پژوهان شیمی تماس بگیرید.
آشنایی با محیط های کشت آزمایشگاه میکروبیولوژی با کارشناسان فروش به دو روش، ابتدا با شماره های مستقیم ارتباط برقرار کرده و یا از طریق کانال واتساپ شرکت محصول به همراه مشخصات ماده را ارسال و در کمترین زمان پاسخ استعلام خود را دریافت نمایید.
راههای ارتباطی
شماره های تماس:
021-66859216
021-66859220 (ساعات تماس:8.30 الی 19)
واتساپ:09129618292 (24ساعت)