سارکوزین کدS9881 را می توانید از شرکت دانش پژوهان شیمی که وارد کننده و توضیع کننده مواد شیمیایی اورجینال بخصوص محصولات نایاب درایران است تهیه کنید. شما می توانید محصول خرید سارکوزین کد S9881 را از این شرکت تهیه نمایید. همانطور که می دانید کمپانی سیگماآلدریچ یکی از بزرگترین تولید کنندگان و توضیع کنندگان مواد شیمیایی در دنیا به شمار می رود.
به جرات می توان گفت که محصولات این برند معروف و نام آشنا را می توان در تمام آزمایشگاهها و مراکز تحقیقاتی یافت. دلیل آن هم تنها به خاطر کیفیت و تنوعی می باشد که مرک در محصولات خود دارد. کمپانی مرک در سال 2015 تصمیم به گسترش شعاع کاری خود شد، از این رو امتیاز شرکت بزرگ تولیدی مواد شیمیایی سیگماآلدریچ را خریداری نمود و از آن پس محصولات مرک آلمان با لیبل مرک & سیگما روانه بازارهای جهانی شد.
مشخصات محصول
یک سنجش رنگ سنجی همراه با آنزیم برای تعیین کمیت سارکوزین ادراری ایجاد شد. روش پیشنهادی یک واکنش خاص بر اساس تشکیل پراکسید هیدروژن (H2O2) از طریق سارکوزین اکسیداز (SOX) است. H2O2 آزاد شده با آمپلکس رد در حضور پراکسیداز ترب کوهی (HRP) برای تولید محصول اکسیداسیون فلورسنت قرمز، رزوروفین، واکنش نشان می دهد که می تواند به روش اسپکتروفتومتری (OD570) اندازه گیری شود.
این روش در پلیت میکروتیتر 96 چاهی انجام شد. شرایط واکنش، مانند pH و زمان واکنش بهینه شد. در شرایط بهینه، حد تشخیص (LOD) و کمیت (LOQ) به ترتیب 0.7 و 1 میکرومولار بود. خطی خوبی با ضریب 0.990 آشکار شد. آزمون هیچ تداخل معنی داری از اسید اسکوربیک، گلوکز و بیلی روبین نشان نداد. علاوه بر این، برای سارکوزین بسیار اختصاصی است تا سایر اسیدهای آمینه.
تعیین سارکوزین در ادرار انسان دقت بالا و قابلیت تکرار خوب را نشان داد. این روش امیدوارکننده است که بیماران سرطان پروستات را از افراد سالم بر اساس سطح سارکوزین ادرار متمایز کند. در مجموع، این مطالعه ابزاری سریع، ساده و خاص برای تعیین سارکوزین ادراری ارائه می‌کند که می‌تواند برای تشخیص سرطان پروستات مفید باشد.
کلمات کلیدی: سنجش رنگ سنجی، سارکوزین، سرطان پروستات، سارکوزین اکسیداز، ادرار
سرطان پروستات (PCa) دومین سرطان تشخیص داده شده در مردان، به ویژه افراد بالای 50 سال است. اگرچه سرطان پروستات می تواند کند رشد کند، اما این بیماری عامل اصلی مرگ و میر ناشی از سرطان در مردان در سراسر جهان است. در حال حاضر، معاینه دیجیتال رکتوم (DRE) و آزمایش خون آنتی ژن اختصاصی پروستات (PSA) دو روش غربالگری PCa هستند که توسط انجمن سرطان آمریکا توصیه شده است (اسمیت و همکاران، 2004 [30]).
با این حال، روش های فوق دارای محدودیت هایی در مورد حساسیت، ویژگی و قابلیت اطمینان خود هستند (Ankerst and Thompson, 2006 [1]؛ Roobol et al., 2007 [27]؛ Aslan et al., 2011 [3]). در نتیجه، استفاده از این روش ها می تواند باعث تشخیص اشتباه شود و منجر به تاخیر در درمان یا درمان بیش از حد شود (لوب و کاتالونا، 2010 [22]).
در نتیجه، تلاش‌های زیادی برای کشف یک نشانگر زیستی بالقوه برای تشخیص دقیق‌تر و برای انتخاب دقیق رژیم‌های درمانی و نظارت به موقع بر پاسخ به درمان انجام شده است (جاماسپیشویلی و همکاران، 2010 [16]؛ کلینت کری و کوپربرگ، 2013 [12]). اخیراً، بسیاری از مطالعات نقش مهمی از سارکوزین (N-methylglycine)، یک محصول میانی در سنتز و تخریب گلیسین، در پیشرفت PCa نشان داده اند (Sreekumar et al., 2009 [31]؛ Khan et al., 2013 [19]). ).
سارکوزین به عنوان کاندید نشانگر PCa پیشنهاد شده است زیرا در طول پیشرفت PCa به متاستاز بسیار بالا می رود، در حالی که در ادرار افراد سالم در غلظت های بسیار پایین تشخیص داده نمی شود (Sreekumar و همکاران، 2009 [31]؛ Bianchi et al. همکاران، 2011 [4]؛ خان و همکاران، 2013 [19]). بنابراین، ابزارهای تشخیصی موثر برای تشخیص سارکوزین در ادرار، یک نمونه غیرتهاجمی، بسیار مطلوب است.
تا کنون، تعیین سارکوزین ادراری با استفاده از رویکردهای مختلف از جمله LC-MS (جیانگ و همکاران، 2010 [17])، GC-MS (کاوالیره و همکاران، 2011 [9]؛ شمسی پور و همکاران، 2013 [29] به دست آمده است. ])، روش فلورومتریک (برتون و همکاران، 2012 [6])، حسگر فوق مولکولی مبتنی بر سطح سیلیکونی عامل دار (بیاوردی و همکاران، 2012 [5])، و نانوحسگر بازتاب سنجی (Diltemiz و Uslu، 2015 [13]).
با این حال، این تکنیک ها دارای معایب عملی هستند، مانند زمان بر بودن، آماده سازی نمونه پیچیده، نیازهای اپراتور ماهر و هزینه بالا، که برای تجزیه و تحلیل معمولی مناسب نیستند. علاوه بر این، برخی از روش های ذکر شده در بالا تداخل با حضور اسیدهای آمینه دیگر، مانند آلانین و گلیسین در ادرار یا به دلیل واکنش های نامشخص با سایر آنالیت های ادراری را نشان دادند (شالکن، 2010 [28]؛ مایر و همکاران، 2011 [24]). ]).
بنابراین، روش های انتخابی و حساس برای تشخیص سارکوزین مورد نیاز است. برای غلبه بر این ایرادات، روش‌های رنگ‌سنجی مبتنی بر آنزیم‌های ویژه سوبسترا با توجه به ارزانی، سادگی، حساسیت بالا و انتخاب‌پذیری آن‌ها پیشنهاد شده‌اند. سارکوزین اکسیداز (SOX) آنزیمی است که دی متیلاسیون اکسیداتیو سارکوزین را به گلیسین، فرمالدئید و پراکسید هیدروژن (H2O2) کاتالیز می کند.
اگرچه تعیین مستقیم سارکوزین می تواند دشوار باشد، کمیت غیر مستقیم را می توان با این واکنش آنزیمی انجام داد (برتون و همکاران، 2012 [6]). با این حال، برخی از سنجش های رنگ سنجی زمانی که ماتریس های پیچیده، ادرار و خون برای تجزیه و تحلیل استفاده می شوند، مشکل دارند، مانند سنجش با استفاده از واکنش متوالی SOX و پراکسیداز با 4-آمینوآنتی پیرین به عنوان یک کروموژن (Kinoshita and Hiraga, 1980 [20]). ).
استفاده از SOX برای تشخیص سارکوزین در نمونه‌های بیولوژیکی، مانند حسگرهای زیستی الکتروشیمیایی و سنجش مبتنی بر نانوذرات قبلاً در ادبیات توضیح داده شده است (Yadav و همکاران، 2012 [37]؛ لان و همکاران، 2014 [21]؛ Rebelo و همکاران. ، 2014 [26]).
را سنجش‌های se ممکن است به دلیل تنوع زیادی در سنتز که منجر به تکرارپذیری آزمایش نمی‌شود، یک نقطه ضعف داشته باشد. علاوه بر این، در مورد سنجش مبتنی بر نانوذرات، درجه پراکندگی نانوذرات به طور مستقیم بر پایداری کاتالیزوری تأثیر می‌گذارد و آزمایش همچنان طولانی است.
در این مطالعه، یک روش رنگ سنجی ساده، سریع و حساس بر اساس واکنش کاتالیزوری SOX و ترب کوهی پراکسیداز (HRP) توسعه داده شد و برای تعیین سارکوزین در نمونه های واقعی ادرار مورد ارزیابی قرار گرفت. سنجش ما در یک صفحه میکروتیتر 96 چاهی انجام شد و جذب با استفاده از اسپکتروفتومتر مرئی UV که به طور گسترده در آنالیز معمول استفاده می شود اندازه گیری شد.
با توجه به مزایای بی رنگ بودن در محلول آبی، پس زمینه کم، پایداری زیاد، حساسیت بالا و توانایی ضد تداخل قوی، به عنوان یک بستر در سنجش استفاده شد (ژو و همکاران، 1997 [39]؛ Votyakova و Reynolds، 2004 [34]). برای تعیین سارکوزین، واکنش آنزیمی در شکل 1 نشان داده شده است (شکل 1). سپس روش بهینه‌سازی شده برای بررسی سارکوزین در نمونه‌های واقعی از داوطلبان سالم و بیماران مبتلا به سرطان پروستات به کار گرفته شد.
همه مواد شیمیایی دارای درجه تجزیه و تحلیل بودند. آمپی سیلین، ایزوپروپیل β-D-1-تیوگالاکتوپیرانوسید (IPTG) و ایمیدازول از شرکت Bio Basic (Markhem، ON، کانادا) به دست آمد. سارکوزین، آمپلکس قرمز (10-استیل-3،7-دی هیدروکسی فنوکزین) و HRP از سیگما آلدریچ (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) سفارش داده شد.
H2O2 و فنل از MERCK (دارمشتات، آلمان) بودند. در تمام آزمایشات از آب فوق خالص سیستم Milli-Q استفاده شد. Pfu DNA پلیمراز از Promega (مدیسون، WI، ایالات متحده آمریکا) به دست آمد. اندونوکلئازهای محدود و لیگاز T4 از New England Biolabs، Inc. (ایپسویچ، MA، ایالات متحده آمریکا) خریداری شدند.
توالی کد کننده SOX از باسیلوس BSD-8 توسط شرکت فناوری های DNA مجتمع (Coralville, IA, USA) سنتز شد. ناقل بیان pET-20b(+)، E. coli سویه NovaBlue و BL21(DE3) از Novagen (دارمشتات، آلمان) به دست آمد.
تولید سارکوزین اکسیداز نوترکیب (SOX)
چارچوب خواندن باز ژن sox با استفاده از PCR با پرایمر فوروارد (5′-ACCATATGAGCACGCATTTTGATG-3’، که زیر آن محل محدودیت NdeI است) و پرایمر معکوس (5′-CAACTCGAGTTTTGC- TGCTTCCTT-3’، با زیر آن محل محدودیت XhoI است) تکثیر شد. ). محصول 1164 جفت باز PCR با NdeI و XhoI بریده شد و به وکتور pET-20b(+) که با همان آنزیم‌های محدود کننده از قبل تیمار شده بود، متصل شد.
پلاسمید نوترکیب با تعیین توالی DNA تأیید شد. بیان پروتئین در E. coli BL21 (DE3) انجام شد. سویه نوترکیب یک شبه در دمای 37 درجه سانتیگراد در محیط LB حاوی 100 میکروگرم بر میلی لیتر آمپی سیلین رشد داده شد. کشت با همان غلظت آنتی بیوتیک به Terrific Broth (TB) منتقل شد و در دمای 37 درجه سانتی گراد، 150 دور در دقیقه انکوبه شد تا OD600 به 0.5 برسد.
بیان SOX با 1 میلی مولار IPTG برای 16 ساعت اضافی در دمای 37 درجه سانتیگراد القا شد. سلول ها با سانتریفیوژ جمع آوری و در بافر A (بافر فسفات 50 میلی مولار، pH 7.4) و به دنبال آن فراصوت معلق شدند. لیزات با سانتریفیوژ پاکسازی شدند. مایع رویی فیلتر شد و روی یک ستون آگارز Ni-NTA بارگذاری شد که با بافر A (بافر فسفات 50 میلی مولار، pH 7.4) با سیستم خالص سازی پروتئین اولیه ÄKTA (GE Healthcare Life Sciences، UK) از قبل متعادل شد.
پس از شستشو با یک گرادیان خطی از بافر B (بافر A + 1 M ایمیدازول)، پروتئین هدف حاوی فراکسیون ترکیب شدند. ایمیدازول حذف شد و پروتئین خالص شده توسط فیلتر Amicon Ultra 10000-MWCO (EMD Millipore Corp., MA, USA) تغلیظ شد. وزن مولکولی و خلوص پروتئین در شرایط دناتوره کردن توسط SDS-PAGE تعیین شد. غلظت پروتئین قبل از نگهداری در دمای 80- درجه سانتی گراد به روش برادفورد اندازه گیری شد.
محلول‌های استاندارد سارکوزین در غلظت‌های 1-200 میکرومولار (1، 2، 3، 4، 5، 10، 20، 30، 40، 50، 100 و 200 میکرومولار) با استفاده از آب مقطر تهیه شد. واکنش‌ها در صفحات میکروتیتر 96 چاهی (SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, Korea) انجام شد و جذب توسط دستگاه میکروپلیت‌خوان (Synergy HTX multi-mode, BioTek, Winooski, VT, USA) اندازه‌گیری شد. ).
حجم کل هر واکنش 200 میکرولیتر بود. واکنش ها با افزودن 127.5 میکرولیتر بافر فسفات سدیم 50 میلی مولار (pH 7.5)، 20 میکرولیتر محلول سارکوزین، 12.5 میکرولیتر آمپلکس رد (0.012 میلی مولار)، 20 میکرولیتر SOX (0.04 U) و 20 میکرولیتر HRP (U0.04 U) انجام شد. ).
جذب (OD570) بلافاصله در دمای 37 درجه سانتی گراد هر 5 دقیقه به مدت 30 دقیقه اندازه گیری شد. همه ی تحقیقات سه بار انجام شد. جذب پس‌زمینه با کم کردن مقدار کنترل بدون سارکوزین از تمام قرائت‌های نمونه تصحیح شد. محدوده pH بهینه در حضور 50 میکرومولار سارکوزین با استفاده از بافر زیر تعیین شد: 50 میلی مولار سیترات برای pH 3-5. 50 میلی مولار سدیم فسفات برای pH 6-7.5 و 50 میلی مولار Tris-HCl برای pH 8-10.
تمام واکنش ها در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه انکوبه شدند. زمان انکوباسیون بهینه با اندازه گیری واکنش هر 10 دقیقه به مدت 90 دقیقه بررسی شد و واکنش در بافر فسفات سدیم 50 میلی مولار با pH 7.5 در حضور 100 میکرومولار سارکوزین انجام شد.
شرکت دانش پژوهان شیمی یکی از بزرگترین وارد کنندگان مواد شیمیایی صنعتی و آزمایشگاهی در ایران می باشد .فروش سارکوزین کدS9881 که در آزمایشگاه ها و داروسازی ها استفاده بسیاری دارد. این ماده وارداتی بوده اما برای جلوگیری از سوء استفاده برخی باید آنرا از نمایندگی ها یا شرکت های معتبر تهیه نمود. شما می توانید از ما آنالیز محصول خودرا نیز دریافت نمایید. شما می توانید برای تهیه مواد شیمیایی آزمایشگاهی (مرک آلمان و سیگماآلدریچ) و یا صنعتی با شرکت دانش پژوهان شیمی به دو روش، ابتدا با خط های مستقیم (فروش) این شرکت تماس بگیرید .خرید فورمونونتین 94334
یا از طریق کانال واتساپ شرکت، محصول به همراه مشخصات را ارسال تا در اولین فرصت استعلام خود را دریافت نمایید.جهت مشاهده اطلاعات جامع تر و آنالیز محصول کلیک کنید.
راههای ارتباطی
شماره های تماس:
021-66859216 (ساعات تماس:8:30 الی 19)
021-66859220
واتساپ:09129618292 (ساعات تماس 24ساعت)